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单细胞SMART-seq服务

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2012 年,由美国和瑞典的科学家共同开发了称为 Smart-Seq(Switching mechanism at 5’end of the RNA transcript)的技术。在 2013 年,Nature Methods 杂志上报告了新的方案,被称为 Smart-Seq2,随后在 2014 年他们有公布了详细的操作流程 。获取单细胞并裂解细胞后,含有 oligo-dT 的引物与 mRNA 的 poly- A 结合,逆转录酶 MMLV 进行逆转录,逆转录酶到达 mRNA 5’末端时,MMLV 的末端转移酶活性会在一链 cDNA 的 3'末端增加额外的胞嘧啶,这时 TSO 引物 3' 末端的 rGrG+ G 结合到第一链末端的胞嘧啶,然后以第一链 cDNA 为模版进行延伸合成互补的第二链,全长 cDNA 经过 PCR 扩增后进一步进行测序文库的构建。


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SMART-seq技术优势

起始量低:1 个细胞起始,适用于难以满足 10X Genomics 等平台起始细胞量要求的样本。

覆盖度高:测序覆盖 cDNA 的全长序列,每个细胞能够获得上万个基因的表达。

信息全面:除了获得基因表达信息,数据能够用于可变剪接,cSNP 等分析,以及带 poly- A 结构的 lncRNA 研究。


SMART-seq样本要求

类型: 新鲜组织,原代细胞,细胞系等。

来源: 血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

样本量: 单个细胞(或微量细胞)。

保存运输: 细胞放入 SMART-seq 试剂盒指定的裂解液中,-80°C 保存,干冰运输。


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