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外泌体高通量检测解决方案

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一、外泌体背景介绍

外泌体(Exosomes)是细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)的一种,大小在30-150nm,由细胞内的多泡小体(Multivesicular bodies,MVB)与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外,广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中,包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。

外泌体广泛参与细胞间物质运输与信息传递,调控细胞生理活动。同时,外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用;此外,外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。


二、中科普瑞外泌体分离和鉴定服务

1. 外泌体的分离

外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等,其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。如果是使用细胞培养上清,要注意细胞培养中一定不能添加 FBS。

外泌体分离方法有很多种,包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。但是这么多方法中,我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离,因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。其他方法的特点如下:

²  过滤离心:得率比较低

²  密度梯度离心:步骤繁琐,得率较低

²  免疫磁珠:特异性比较高,得率较低

²  商用试剂盒:价格高,效果一般。分离出的外泌体电镜和粒径效果差。

超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。

 

2. 外泌体的鉴定

外泌体分离之后,需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。

²  透射电镜鉴定法:简称TEM,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。

²  纳米颗粒跟踪分析法:简称NTA,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

²  Western blot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白。


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三、中科普瑞外泌体高通量检测服务

外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸,可以运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞,参与细胞间通讯。不同细胞来源的外泌体所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。中科普瑞利用平台优势,为广大客户提供『外泌体高通量检测服务综合解决方案』。

中科普瑞外泌体高通量检测服务内容

²  外泌体全转录组测序服务

²  外泌体lncRNA测序服务

²  外泌体circRNA测序服务

²  外泌体mRNA测序服务

²  外泌体miRNA测序服务

²  外泌体芯片检测服务(ceRNA芯片)



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